氨基酸的测定

  氨基酸的测定 : 对植物样品中一类含氨基的有机化合物进行定量分析的过程。测定植物生育期中体内氨基酸的含量,对于研究根系生理、氮素代谢有重要作用。在评价谷物和其它作物产品以及饲料的营养价值时,需要测定氨基酸的总量及全氨基酸中各个氨基酸的含量。
测定氨基酸总量的方法与蛋白质测定有密切关系,许多测定蛋白质全氮含量的方法如凯氏法及各种比色法均可用于测定氨基酸的总量。比较常用的方法为茚三酮比色法及各种色谱法。应用最早的纸层析法,设备操作简单,但分离效果差,难于定量;薄层层析,层析速度快,灵敏度比纸层析高。气相色谱法,分析速度快、灵敏度高,唯分析前必须将氨基酸转化为易挥发的衍生物,才能测定。有一些氨基酸容易热分解,影响定量结果。高效液相色谱(HPLC)法对氨基酸分析是一种快速而可靠的方法。
茚三酮比色法
在一定pH值下,游离氨基酸与水合茚三酮反应,生成蓝紫色的茚二酮炔一茚二酮胺(diketohydrindy lidene diketohydrindamine,简称DY-DA)。其颜色的深浅与氨基酸含量成正比。据此,可用分光光度计,在波长570纳米下,测定DYDA的吸收值。用以计算试样中氨基酸的含量。
氨基酸自动分析仪法
见氨基酸分析仪。
高效液相色谱法
通常将氨基酸转化为具有荧光的DNS—氨基酸(是荧光试剂DNS-Cl二甲基氨基萘磺酰氯与氨基酸结合成的衍生物),以荧光检测器测定氨基酸。下图是DNS-氨基酸高效液相色谱图,是用荧光检测器鉴定的。从图中可以看出,使用高效液相色


DNS一氨基酸高效液相色谱图


1. DNS-Cl; 2. DNS-酰胺;3.异亮氨酸; 4.亮氨酸5.缬氨酸;6.脯氨酸;7.苯丙氨酸;8.蛋氨酸; 9.丙氨酸;10.赖氨酸;11.酪氨酸;12.甘氨酸;13.色氨酸14.谷氨酸;15.苏氨酸;16.丝氨酸; 17.门冬氨酸; 18.为1~17的化合物;19.胱氨酸; 20.组氨酸;21.精氨酸

谱法,结合荧光检测技术可以有效的分离及测定氨基酸。选择激发波长为340纳米,发射波长为510纳米。也有将氨基酸生成有紫外吸收的衍生物,用紫外检测器检测;用得最普遍的是制成苯基海硫因氨基酸(PTH氨基酸)。不但便于紫外检测,而且也是测定多肽和蛋白质中氨基酸顺序的重要技术。

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